A kötelező nukleinsavak vagy fehérjék , a high- megkötő anyaggal nevezett PVDF ( polivinil difluoride ) membrán támogatást nyújt az antitestek . Keresztül Western blot , a membránokat halmozott össze , előkészítve az antitest , majd szárítjuk. Jegyzőkönyv szárítás a membrán ismerni kell membránok működik, katód lemezek, anód lemez és alkalmazása metanol megoldásokat. A megfelelő protokollt , a membrán biztonságosan kötődik a specifikus antitest és készen áll az azonnali használatra vagy tárolásra . Előkészítése membrán
előkészítése PVDF membrán tisztítja és stabilizálja a membrán az átruházás előtt . Szárítás előtt a membrán ” blokkolva ” hogy megakadályozzák kötelezőek semmi más, mint az egyedi nukleinsavak, mint például a nem-specifikus antitestek . Ezen eljárás során , akkor a membránt nedves azáltal, hogy a sík felületen borítja metanolban. A membrán színe megváltozik alatt ez a mondat , az átlátszatlan a félig átlátszó . Miután befejeztük a metanol fürdőn , a membránt helyezünk ionmentes vízben ázni körülbelül két percig. A membránt ezután ismét egy ázni metanolos oldatban , amely erősen savas .
Assembly of Membránok Mielőtt Transzfer Matton
Két membrán papírok áztatjuk az első metanolos oldatban és elhelyezni egy anód lemez . Ennek során meg kell alaposan ellenőrizni beszorult légbuborékok , ami veszélyeztetheti az átadás. Egy másik darab átitatott szűrőpapír a második metanolos oldatban , és elhelyezni a tetején a verem. Gél , majd megy a tetején a membrán , és arra, hogy ne csapda légbuborékok közötti alkalmazás és a gél membrán . Három új darab papír ezután áztatjuk egy puffert és katód tetejére helyeztük a gél . Ha a levegő fortyogó fordul elő , a kémcső dolgozik, hogy kisimítja a membránok .
Transfer
ez része a folyamatnak , akkor csatlakoztassa nagyfeszültségű zsinór a tápegységet , és alkalmazza állandó áram a gél terület membrán 30 percig. Transzfer alkalommal változik attól függően, hogy milyen típusú ellenanyag . 30 perc után , akkor húzza ki a hálózati és átadása membrán . A jobb alsó sarokban a membrán , majd vágja ellenőrizni orientáció. Az első két réteg szűrőpapír eldobjuk , beleértve a gélből. A zenekar a molekulatömeg vannak jelölve a golyóstoll .
Szárítás
Miután az átvitel befejeződött , szárazon a membrán két módon . A gyorsabb száradás , a membránt 100 százalékban áztatott metanolban 10 másodpercig , hogy eltávolítsa a vizet. A membránt ezután nyugszik egy darab papírtörlő 15 percig. Ahhoz, hogy egy lassabb szárítási módszer, a membránt helyezünk a papírtörlővel metanol hozzáadása nélkül . Miután megszáradt, a membrán használata és tárolása száraz edényben 4 Celsius fok későbbi használatra.
