Sanger- féle reagenst használunk , hogy segít meghatározni a szekvencia az aminosavak , amelyek egy peptid . A reagens kilincs-ra – vagy címke – az aminosav a legvégén egy peptidlánc , szintén ismert, mint az N -terminálison. A peptidet ezután darabokra törik ( hidrolizáljuk ) és az egyes aminosavak alkalmazásával vizsgáltuk különböző kromatográfiás módszerekkel. Bármelyik aminosav hordozza a címke az egyik végén . Sanger -féle reagenst is ismert dinitro ( DNFB ) . Amint már becsukott rá egy aminosav , úgy nevezik, mint a DNP – compound.Things amire szüksége van
Laboratóriumi mérleg
Gloves
Védőszemüveg
centrifuga
Centrifugacsövek
Pasteur- pipetta
Desztillált víz 4,2% nátrium -hidrogén-karbonát -oldatot
Sanger -féle reagenst ( FDNB ) photo pH-papír
Dietil -éter
6M sósavoldat
Aceton
Teszt cső
Show More utasítások
1
Mérjünk ki 3 miligrams peptid skálán . Tegye egy centrifugacsőbe. Adjunk hozzá körülbelül 0,3 ml vizet , 0,3 ml Sanger -reagenst és 0,075 ml nátrium- hidrogén-karbonát . Matton 2
Hagyjuk a centrifugacsőben inkubáljuk szobahőmérsékleten egy órán át. Az inkubálás alatt a csövet gyengéden rázzuk , hogy megakadályozzák a keveréket elválasztó . Ellenőrizzük a pH-ja az oldat 15 percenként pH papírral . A pH-t kell tartani 9 fölé. Ha elkezd csökkenni , adjunk hozzá egy kis mennyiségű nátrium -hidrogén-karbonát (körülbelül egy csepp a Pasteur- pipettával ) .
3
Az inkubálás után , adjunk hozzá 1.5 ml vizet, és azonos mennyiségű éterrel mossuk. Hagyja, hogy a megoldás , hogy külön a rétegeket. Lehet, hogy centrifugáljuk a keveréket , hogy elkülönüljön . Vegye ki az éteres réteget ( felső , sárga réteg) pipettával , és dobja el .
4
Állítsuk be a pH-t le 1,0 lassú hozzáadásával sósav . Adjunk hozzá egy kevés kis sav egy időben, keverjük össze , majd ellenőrizze a pH-értéket pH papírt. Összességében , azt szükséges mintegy 0,15 ml savas . Ha a pH 1,0 alá megy , adjunk hozzá egy kis mennyiségű ( nem több, mint egy csepp ) nátrium- hidrogén-karbonát .
5
hozzáadása 3 ml éterrel extraháljuk. Hagyjuk, hogy a keverék elválasztásához . Most a felső réteg ( a sárga , éter réteg) tartalmazza a DNP – vegyület . Pipettával gondosan kicsomagolta ezt a réteget, és öntsük egy tiszta kémcsőbe . Helyezze a kémcsövet félre, és lehetővé teszi a folyadék elpárolog , maga mögött hagyva a száraz, sárga, szilárd anyag .
6
mosson szilárd acetonnal . Add 0,3 milliliter acetont , keverjük össze , és vonjuk ki a folyadékot pipettával . 0,75 milliliter hozzáadása sav a teszt csőbe . A peptid most megjelölt , és készen áll a hidrolizáljuk, és elemezni a kromatográfiás módszert választott .
