Növény szerves anyag alkotja sok sejt , amelyek mindegyike tartalmazza a DNS-t , hogy tartja a növekedés és utasításokat funkciót. A tudósok úgy dönthet, hogy tanulmányaik egy részét vagy egészét a genetikai anyag jelen a sejtekben , és így kell, hogy biztonságosan kivonat a DNS-t a szerkezeti anyag és sejt gép , ami körülveszi it.Things amire szüksége van
2 gramm levelek
mozsárban
Centrifuga
vízfürdő
Balance
Géz
Six 15ml Centrifugacsövek
Egy 1,5 ml- es Eppendorf csőbe
100ml CTAB extrakciós puffer
2 ml béta-merkaptoetanol
7ml 24: 1 arányú kloroform : izoamil-alkohol elegyet
50 mikroliter RNáz -A koncentrációja 10 mg /ml-es pipettákat
6ml
izopropanol 2 ml 70 % etanol
1ml steril ionmentes vízben
Show More utasítások
1
Töltse fel a vízfürdőbe az ajánlott szint vízzel , amely eltér az egyes gyártó specifikációja és kapcsolja be. Állítsa be a vízfürdőben 65 Celsius fok , és lehetővé teszi azt , hogy jöjjön fel a hőmérséklet . Helyezze a izopropanol tartályt jégen . Állítsa be a centrifuga 3000 fordulat percenként hőmérsékleten 20 Celsius fok .
2
Mérjünk ki 2 g hagy egy egyensúly , és tegyük őket a habarcs . Adjunk hozzá annyi béta – merkaptoetanol keresztül pipettával egy tartályba extrakciós puffert , így a végtermék alkotja 01:59 százalékban béta -merkapto-etanol . Például , ha van egy térfogatú puffer , amely méri a 100ml, majd adjunk hozzá 2 ml béta- merkaptoetanol a tartályba, és alaposan keverjük össze .
3
Pipettázzunk 7 ml extrakciós puffert a habarcs . Összetörni a keveréket egy homogén folyadék, mozsártörővel . Matton 4
Fold egy darab cheesecloth felett alkotnak négy rétegből áll. Szűrjük le, és nyomja a folyadékot a rétegeket egy 15 ml-es centrifuga csőbe .
5
Helyezzük a csövet a vízfürdőbe 30to 60 percig. Örvény a cső , hogy a tartalma összekeveredjen minden negyed óra . Hagyjuk , hogy a csövet szobahőmérsékletre lehűlni után a teljes időtartam múlik .
6
tetejére fel a csövet a kloroform és izoamil-alkohol keverékkel ( ez tartalmaz 24 rész kloroformot és egy rész izoamil-alkohol ) , így a csőben nagyjából fele a minta fele az új folyadék mellett . Zárja le a csövet, és fordítsa fejjel lefelé egy párszor, lassan, a folyékony keverékek .
7
A kémcsövet a centrifuga és hagyjuk, hogy a spin -on 10 percig .
8
Place 50 ml RN-áz egy új centrifuga csőbe . Pipettázzunk a felülúszót ( a tiszta réteg tetején a cső fölött egy fehér réteg törmelék ) az első cső és le mozgassa a második csőbe. Zárja le a kémcsövet és forgassa meg néhányszor, hogy a tartalmát összekeverjük együtt . Tartsa a csövet szobahőmérsékleten egy órán át.
9
Végezze el a 6. és 7. újra kétszer , így van egy tiszta kémcsőbe. Ezután pipettázzunk akár 9 ml-t a tiszta folyadék a végső csövet egy új csőbe. 6 ml izopropanol és fordítsa a csöveket 10-szer , egy szelíd módon , így a DNS- kiesik a megoldást, és egy szilárd formában. Ezután a csövet centrifugáljuk 10 percig , amelyet létre kell hozni egy DNS üledéket a cső alján . Matton 10
Öntsük le a folyadékot , így a csőben marad a pellet . Pipetta 2 ml 70% etanol és tegyük vissza a centrifuga öt percig . Öntsük le a folyadékot rész újra. Használjon steril pipettával , hogy vegye fel a pellet , és mozgassa a steril 1,5 ml-es Eppendorf csőbe . Pipettázzunk 200 mikroliter steril ioncserélt vízzel, és hagyja, hogy a DNS-t teljesen feloldódjon a folyadékban , amely akár egy éjszakán át. A minta készen áll az elemzés .
