glutation, GSH egy fehérje megtalálható mind a növények és állatok . Úgy működik, hogy segítse az enzim reakciókat a méregtelenítés a környezeti szennyező anyagokat. Ezen túlmenően, ez megkönnyíti aminosav transzport sejteken belül, és segít fenntartani a fehérje szulfhidril redukciós reakciókat . GSH vizsgálati protokollok használata GSH pufferek , szabványok, aljzat , enzimek és reagensek. Miután a konkrét eljárást helyénvaló , hogy az eredmény a vizsgálatban. Enzimatikus újrahasznosítási módszer
enzimatikus újrahasznosítási módszer , a GSH , használja a glutation reduktáz számszerűsíteni GSH . Ez a protokoll kifejezetten a plazma- , szövet-vagy tenyésztett sejt mintákban. Hozzáadjuk a DTNB reagenssel (5- 5′ -ditio – bisz -2 -nitro-benzoesav ) , hogy a GSH . A GSH- szulfhidril csoport reakcióba lép a reagenssel , és egy sárga sav néven 5- tio – 2 -nitro-benzoesav ( TNB ) . Add a glutation -reduktáz a sav és GSH keveréket újra GSH és több sav . Ebben az eljárásban a sav- termelés mértéke arányos a reakció GSH újrahasznosítása ; Ezért , az intézkedés a abszorbanciája TNB sav spektrofotométer alkalmazásával . Abszorbanciája ad becslést a tényleges összeg a GSH a mintában .
Májsejt glutation vizsgálat
Ez a protokoll elemzi az összeget a GSH emberi hepatocarcinoma ( májrák ) sejtek . Ahhoz, hogy ez a magatartás eljárást használja kolorimetriás módszer GSH elhatározását, hogy csökkentse és oxidálódik GSH . Csökkenti a GSH alkalmazásával 5 -5′ -ditio-bisz ( 2 -nitro-benzoesav vagy DTNB ) reagáltatva a
színezett terméket 2 -nitro -5- tiobenzoesav és oxidált glutation ( GSSG ) . Használja a glutation reduktáz csökkentése GSSG formában GSH újra. Annak érdekében, hogy mennyiségének mérésére GSH a májsejtekben , olvassa el a mintát 415 abszorpciós kinetikai on lemezleolvasóval .
Apoptózis
Ebben az protokoll , a GSH kimutatására használják sejt apoptózis ( halál) keresztül a mérés a csökkent GSH csökkenése . A csökkenés a celluláris GSH koncentrációja jelzi a sejthalál . Folt a minta sejtek nem fluoreszkáló thiolite zöld. A zöld thiolite citoszolban halmozódik fel a (cella plazma) és a mitokondriumok ( erőmű ) a sejt. Használjon áramlási citométer a 490/520 nanométer , hogy szemléltesse az összeget a GSH a sejtekben.
Teljes koncentrációja GSH Állati és növényi minták
koncentráció mérésére össz-GSH mind a redukált és oxidált formája a különböző állati és növényi minták . Hozzáadjuk a tiol reagenssel általános , 5 -5′ -ditio-bisz [ 2 -nitro-benzoesav ] . A tiol- reagens reakcióba lép a GSH alkotnak 412 nm- kromofor , 5 – thionitrobenzoic sav ( TNB ) és GS- TNB . Add glutation reduktáz és a béta -nikotinamid -adenin- dinukleotid -foszfát ( NADPH ), hogy csökkentsék a GS – TNB . A glutation is kiadja a második TMB molekula , és újra a GSH . Ezen túlmenően bármely oxidált GSH ( GSSG ) a keverékben jelenlévő fromed diszulfid a reakció is csökken , hogy a GSH . Használjon microplate olvasó 405 nanométer , hogy olvassa el a abszorbanciaszintet és jelzi a teljes koncentráció GSH .
