Western -blot , egy analitikai technikát használnak , hogy pontosan egy specifikus fehérje egy adott mintában , a képességét alkalmazza egy enzim vagy fluoreszcens jelzett primer ellenanyag kötődik a specifikus antigénhez. Ez egy három lépésből álló folyamat kezdődő gél elektroforézissel , majd a membrán -blot és tapintási antitestekkel . Fehérje detektálás lehet közvetlen vagy közvetett , az utóbbi egy jelzett szekunder antitest ellen irányuló primer . Bár elfogadott rutin protein elemzési technika, western blot megvannak a maga korlátai , valamint az előnyöket. Előny : Érzékenység : Matton
Az egyik legnagyobb mellett szóló érvek western blot érzékenységét . Mivel , hogy képes felismerni a mindössze 0,1 nanogramm fehérje egy mintában , a technika elméletileg szolgálhat egy hatékony korai diagnosztikai eszköz , még a legcsekélyebb érzékelés immunogén válasz egy vírus vagy baktérium egy beteg mintájában . Egy közvetett Western blot tovább épül ez az érzékenység a másodlagos antitest azon képességét , hogy megerősítsék az intenzitása a jel által érzékelt képalkotó rendszer . Nagyobb érzékenység azt jelenti, hogy kevesebb antitesteket szükség a vizsgálathoz , ami csökkenti a laboratóriumi költségeket jelentősen .
Előny : specificitás : Matton
A western blot technika köszönheti sajátosságait, a két nagy kiváltó tényezők . Először is, egy gél elektroforézis rendezi mintát fehérjék különböző mérete, töltése , és a konformáció . Ez a folyamat már önmagában is óriási lépés a felismerés , sávok alakult a gél már ad nyomokat a méret a fehérje vagy polipeptid . A specificitását az antitest – antigén kölcsönhatás szolgál a második nagy tényező. Mivel a specifikus antitestek affinitást mutatnak specifikus fehérjék , a folyamat szelektíven észleli a célpont fehérje még keverékében 300.000 különböző fehérjét .
Hátrány : hajlamosak a hamis vagy szubjektív eredménye
annak ellenére, hogy érzékenysége és specificitása , a western blot még hibás eredményt . A hamis pozitív eredményt , ha egy antitest reagál olyan nem szándékolt fehérje , ami gyakran mi történik, ha egy páciens HIV-tesztet is előfordul, hogy a tuberkulózis vagy több parazita fertőzések. A hamis negatív , másrészt , könnyen eredményezheti , ha nagyobb fehérjék nem kapnak kellő időben át megfelelően a membránt . Helytelen blot és feldolgozása gyakran termelnek ferde, kifakult , vagy akár több sávra , hogy a vizsgálati eredmények függvényében az értelmezése a szakember .
Hátrány : magas költségek és a műszaki Demand
az ára egy western blot egy összetett nagy egyéni kiadások címkézett antitestek , szakképzett elemzők és laboratóriumi felszerelés. A kényes folyamat , western blot pontosságot igényel minden lépésnél megfelelő azonosításához a minta összetevői . Egy kis hiba a reagenskoncentrációt vagy lappangási idő is katasztrofális az egész folyamat . Végül , a szükséges eszközök felderítése és képalkotás – kemilumineszcens , fluoreszkáló , radioaktív , vagy lézeres érzékelő rendszerek – lehet túl drága az átlagos mikrobiológiai egység .
